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Préparation de l'inoculum et ensemencement d'un milieu solide


Date de la dernière modification
: 20-04-2017

A - MATÉRIEL 

   * Boîtes de Pétri stériles, gélose nutritive dans tubes à bouchon, étaloirs coudés, bec Bunsen.

   * Galerie vide, 1 verre de montre, pissette avec eau, pipette Pasteur.

   * Cristallisoir avec eau de Javel, 1 marker, 1 poubelle avec sac nylon. 

B - PRÉPARATION DU MILIEU SOLIDE  

   Allumer le bec Bunsen. Sortir un tube de gélose du bain-marie et le verser rapidement dans la boîte de Pétri, en travaillant dans la zone stérile. (Soulever légèrement le couvercle - ne pas l'ôter - refermer aussitôt). 

 

 

C - PRÉPARATION DE L'INOCULUM  

   Au-dessus du verre de montre, on se verse quelques gouttes d'eau sur les doigts, en les frottant légèrement. Le liquide ainsi recueilli contient de très nombreux germes qui sont naturellement présents sur la peau. 


 

 ATTENTION : par la suite, il conviendra d'être très prudent(e) et de respecter les consignes d’asepsie, car certains de ces germes sont pathogènes.

D - ENSEMENCEMENT  

 

   * On casse l'extrémité d'une pipette Pasteur et on la passe rapidement à la flamme (éviter la fusion du verre).

   * On aspire ensuite un peu de liquide du verre de montre et on en dépose 1 ou 2 gouttes sur le milieu de culture (vérifier qu'il est bien solidifié).

   * Refermer la pipette Pasteur à la flamme et la déposer dans la galerie, pointe vers le haut. Attention aux brûlures.

   * Avec un étaloir, répandre l'inoculum sur toute la surface du milieu de culture. Refermer la boîte de Pétri et mettre ses initiales, car elle sera réutilisée ultérieurement. Placer la boîte à l'envers dans une étuve à 37°C.

   * Placer l'étaloir et le verre de montre dans l'eau de Javel, la pipette Pasteur dans le sac nylon de la poubelle.

Remarque :  Ces cultures seront utilisées lors d'une prochaine séance pour une coloration de Gram. 


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