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Avec le coffret "Institut Pasteur"


Date de la dernière modification
: 21-04-2017  

A - MATÉRIEL 

Coffret "Institut Pasteur" : tubes 1 (bacilles = Enterobacter cloacae) et 2 (streptocoques = Streptococcus fœcalis), E1 et E2 (bouillon nutritif glucosé au BCP = pourpre de bromocrésol), F1 et F2 (gélose nutritive glucosée au BCP).

Galerie, pipettes Pasteur, öses bouclées, becs Bunsen, boîtes de Pétri stériles.

Remarque : les milieux nutritifs glucosés au BCP peuvent être achetés dans le commerce, ou fabriqués au laboratoire.
 

B - PRÉPARATION DES BOÎTES DE PÉTRI  

* Verser le contenu des tubes F1 et F2 dans 2 boîtes de Pétri (marquées F1 et F2). Attendre le refroidissement complet. (Pendant ce temps, préparer les tubes de milieu liquide).

* Passer rapidement à la flamme une öse bouclée.

* Déboucher le tube 1 et prélever stérilement une goutte de liquide avec l'öse.

* Passer rapidement l'ouverture du tube 1 à la flamme avant de le refermer.

* Ensemencer la boîte de Pétri F1 dans la zone de stérilité (voir schémas).

* Passer l'öse à la flamme et recommencer avec le tube 2 et la boîte de Pétri F2. 

 
 

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Ensemencement du milieu solide par stries parallèles ou par zigzag

C - PRÉPARATION DES TUBES DE MILIEU LIQUIDE  

* Passer une pipette Pasteur à la flamme, puis prélever l'inoculum dans le tube 1.

* Passer l'ouverture du tube 1 à la flamme avant de le refermer.

* Ouvrir le tube E1 et l'ensemencer. Le refermer sans serrer le bouchon.

* Recommencer toutes ces opérations avec les tubes 2 et F2.  

* Les tubes E1, E2 ainsi que les boîtes F1 et F2 sont mis à l'étuve (18 à 24 h à 37°C ou 3 jours à 20°C).  

D - RÉSULTATS EN MILIEU LIQUIDE  

Tube E1 + bacilles

* trouble dû à la prolifération

* le milieu vire du violet au jaune :  la souche est glucose

* présence de gaz dans la cloche : la souche est gaz +

Tube E2 + streptocoques

* trouble dû à la prolifération

* le milieu vire du violet au jaune : la souche est glucose +

* absence de gaz dans la cloche : la souche est gaz -

E - RÉSULTATS EN MILIEU SOLIDE 

   Après incubation convenable, on observe l'apparition de colonies jaunes pour les 2 souches. Le milieu a viré au jaune. Elles sont glucose + (c'est-à-dire qu'elles consomment le glucose). 

Remarque : en utilisant le glucose (ou le lactose), les bactéries acidifient le milieu. Dans ce cas, le pourpre de bromocrésol vire au jaune. C'est donc un indicateur du pH.


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