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Avec le coffret "Institut Pasteur"


Date de la dernière modification
: 22-04-2017

A - MATÉRIEL  

   * Coffret "Institut Pasteur" : tubes 1 (bacilles = Enterobacter cloacae) et 2 (streptocoques = Streptococcus fœcalis), tubes G1 et G2 (gélose lactosée au BCP = pourpre de bromocrésol).

   * Galerie, pipettes Pasteur, öses bouclées, becs Bunsen, bain marie bouillant.

Remarques

Le milieu nutritif lactosé au BCP est fabriqué par notre aide de laboratoire, mais peut aussi être acheté dans le commerce (voir annexes).

Les bactéries des tubes 1 et 2 (Pasteur) peuvent être remplacées par d'autres souches (Escherichia coli par exemple).

B - PRÉPARATION DES TUBES  

* Déboucher légèrement chaque bouchon des tubes G1 et G2 de gélose lactosée au B.C.P.

* Faire fondre les 2 tubes au bain marie bouillant ou au four à microondes.

* Poser les tubes afin que la gélose reste inclinée en se refroidissant.

* Laisser solidifier puis sécher pendant 30 minutes à l'étuve, à une température de 37 à 50°C.

 

Pour gagner du temps, ces 4  premières opérations peuvent être faites au laboratoire avant la séance.

*  Débloquer les bouchons des tubes 1 et 2 (bacilles et streptocoques).

*  Passer l'extrémité d'une öse bouclée à la flamme.

*  Déboucher le tube 1 et prélever stérilement une goutte de liquide.

*  Passer l'extrémité du tube 1 à la flamme et le refermer soigneusement.

*  Ensemencer le tube G1 en zigzag ascendant, sans endommager la gélose.

*  Passer l'ouverture du tube G1 à la flamme et le refermer sans serrer le bouchon.

*  Stériliser l'öse à la flamme.

 

Recommencer toutes ces opérations avec le tube 2 (streptocoques) et G2.

Les tubes G1 et  G2 sont mis à l'étuve (18 à 24 h à 37°C ou 3 jours à 20°C).

C - RÉSULTATS    

Tube G1 + bacilles

* Colonies de 1 à 2 mm.

* Le milieu ne change pas de couleur : la souche est lactose -    (L -) : elle n'utilise pas le lactose.

Tube G2 + streptocoques

* Colonies de 0,5 à 1 mm.

* Le milieu vire du violet au jaune : la souche est lactose +  (L +) : elle utilise le lactose.

G1 : bacilles

* colonies
* pas de décoloration

T : tube témoin

G2 : streptocoques

* colonies
* décoloration

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