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Avec le filtre "Millipore"


Date de la dernière modification
: 22-04-2017

A - MATÉRIEL  

* « Stérifil » (voir schéma) avec filtres, tampons, boîtes de Pétri, seringue, tuyau souple et valve à 2 voies. Filtre à air (à placer sur l’entonnoir).

* Filtre « Swinnex » pour stériliser l’eau. 1 bécher de 500 ml. 

* Becs Bunsen, pipeteur, milieu de culture Millipore ou bouillon nutritif, pinces fines, pipettes Pasteur.

B - PRÉPARATION DU LIQUIDE  

   * Mettre un filtre neuf dans le Swinnex et filtrer environ 350 ml d’eau du robinet.

   * Un(e) élève se lave soigneusement les mains avec cette eau pour obtenir une suspension des germes de la peau.

   * En restant près de la flamme du bec, on prend un filtre avec une pince passée à la flamme et on le place sur la grille support (côté quadrillé vers le haut).

   * Avec pipeteur et pipette, on prélève environ 20 ml de cette suspension et on les transvase dans l’entonnoir du Stérifil.

   * On branche le système d’aspiration (tuyau et seringue) et on « pompe » pour faire passer le liquide dans le flacon récepteur.

   * On dévisse ensuite le système pour accéder au filtre.

   * On peut immédiatement recommencer pour un(e) autre élève.

C - PRÉPARATION DE LA BOÎTE DE PÉTRI  

* À côté de la flamme bleue d'un bec Bunsen (attention aux brûlures !) on ouvre la boîte de Pétri Millipore (partie non gravée vers le haut) et, avec une pince passée à la flamme, on dépose un tampon.

* On l’imbibe ensuite d’une ampoule de milieu Millipore ou avec une pipette Pasteur et 2 ml de bouillon nutritif.

* On place ensuite le filtre quadrillé sur ce tampon en évitant la formation de bulles d’air.

* La boîte de Pétri est aussitôt refermée.

D - MISE EN INCUBATION ET OBSERVATION  

Les boîtes de Pétri seront placées à l’envers dans une étuve à 37°C et pourront être observées après 2 à 3 jours.

OBSERVATION SANS COLORATION

    Dans une boîte de Pétri, placer une goutte d’huile à immersion puis, par-dessus, le filtre préalablement séché. Il devient transparent. On peut alors le poser sur une lamelle pour observation au microscope.

OBSERVATION APRÈS COLORATION : voir notice Millipore

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