A
- MATÉRIEL
* Boîtes
de
Pétri
stériles.
Tubes
avec
gélose
nutritive
(ou
milieu
total)
dans
bain
marie
à
55°C.
On
peut
aussi
réaliser
cette
expérience
avec
les
tubes
M1,
M2
et
M3
(milieu
C.L.E.D.)
du
coffret
Pasteur.
* Bec
Bunsen,
galerie,
marker,
pince
en
bois
pour
tenir
les
tubes
chauds,
chiffon.
B
- PRÉPARATION
DES
BOÎTES
DE
PÉTRI
* Couler
chaque
tube
encore
liquide
dans
les
3
boîtes
de
Pétri, dans
la
zone
de
stérilité
du
bec
Bunsen,
en
évitant
de
faire
des
bulles
et
en
ouvrant
le
couvercle
au
minimum.
* Laisser
refroidir
la
gélose
pendant
20
à
30
minutes.
* Sur
le
côté
des
couvercles,
inscrire
"5
min",
"30
min",
"1
heure"
et
ouvrir
les
3
boîtes.
Les
laisser
ainsi
ouvertes
pendant
les
durées
indiquées.
* Pour
mettre
en
évidence
l'efficacité
du
bec
Bunsen
en
ce
qui
concerne
la
zone
de
stérilité,
3
boîtes
"T"
témoin
seront
laissées
ouvertes
pendant
les
mêmes
durées
à
10
cm
environ
d'un
bec
allumé.
* A
la
fin
de
la
séance,
toutes
les
boîtes
seront
placées
à
l'envers,
dans
une
étuve
à
37°C
pour
incubation.

C
- RÉSULTATS
L'observation
peut
se
faire
dès
le
lendemain,
mais
compte
tenu
du
développement
plus
long
des
levures
et
moisissures,
elle
devra
se
poursuivre
au
cours
des
jours
suivants
(jusqu'à
une
semaine).
On
observe
alors
l'apparition
de
colonies
(bactéries,
levures,
moisissures)
dans
les
boîtes
de
Pétri,
d'autant
plus
nombreuses
que
la
boîte
a
été
plus
longtemps
ouverte.
Les
boîtes
et
les
milieux
de
culture
étant
stériles, les
germes
qui
ont
formé
ces
colonies
étaient
en
suspension
dans
l'air
de
la
salle.
Dans
les
3
boîtes
témoin
(placées
dans
la
zone
de
stérilité
du
bec
Bunsen),
le
nombre
des
colonies
est
nul
ou
très
faible. Cette
expérience
montre
l'efficacité
de
cette
zone
stérile.
En
effet,
à
proximité
du
bec
allumé,
les
ascendances
d'air
empêchent
que
les
germes
ne
tombent
sur
les
milieux
de
culture
lorsque
les
boîtes
sont
ouvertes.
D
- UTILISATION
ULTÉRIEURE
Ces
boîtes
seront
conservées,
soigneusement
scotchées
et
pourront
servir,
lors
de
prochaines
séances,
à
de
nombreuses
observations
:
-
Levures
et
moisissures
après
coloration.
-
Bactéries
après
coloration.
-
Bactéries
après
étalement,
fixation
par
la
chaleur
et
coloration.
-
A
cette
occasion,
on
pourra
refaire,
si
besoin
est,
une
coloration
de
Gram.
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